Дар ҷараёни гузаронидани таҳқиқоти генетикӣ, мо аксар вақт бо намунаҳои нокифояи РНК дучор мешавем, масалан, барои омӯзиши варамҳои хурди анатомикии даҳон, ҳатто намунаҳои якҳуҷайра ва намунаҳои мутатсияҳои гении мушаххас, ки дар сатҳи хеле паст дар ҳуҷайраҳои инсон транскрипт карда мешаванд.Албатта, барои санҷиши COVID-19, агар тампонҳо дар ҷои дуруст набошанд ё вақти кофӣ набошанд, андозаи намуна хеле кам хоҳад буд, аз ин рӯ Комиссияи тандурустӣ ва банақшагирии оила ду рӯз пеш баромад ва аз санҷиш гузашт ва агар намунагирандаи кислотаи нуклеинӣ шаш намуна нагирифта бошад, шумо метавонед дар ин бора хабар диҳед.
Ҳассосияти реактив муҳим аст, зеро мо ин ё он мушкилот дорем, пас мо барои беҳтар кардани ҳассосияти RT-PCR чӣ кор карда метавонем?
Пеш аз он ки мо роҳҳои ҳалли имконпазирро муҳокима кунем, биёед ду мушкилии калонро бо вазъияте, ки дар боло зикр кардем, зикр кунем.
Пеш аз ҳама, мо дар бораи талафоти РНК хавотир мешавем, вақте ки мо дар намунаи мо танҳо якчанд популятсияи ҳуҷайра дорем.Агар усулҳои анъанавии ҷудокунӣ ва тозакунӣ, ба монанди усули сутун ё усули боришоти кислотаи нуклеинӣ истифода шаванд, эҳтимолияти гум шудани чанд намуна вуҷуд дорад.Як ҳалли он илова кардани молекулаи интиқолдиҳанда, ба монанди tRNA мебошад, аммо ҳатто дар ин ҳолат, ҳеҷ кафолате нест, ки таҷрибаи барқарорсозии мо хуб аст.
Пас, кадом роҳ беҳтар аст?Варианти хуб барои ҳуҷайраҳои парваришшуда ё намунаҳои микроанатомӣ истифодаи лизи мустақим аст.
Идеяи он аст, ки ҳуҷайраҳоро дар тӯли 5 дақиқа тақсим кунед, РНК-ро ба маҳлул раҳо кунед, пас реаксияро барои 2 дақиқа қатъ кунед, пас лизатро мустақиман ба реаксияи транскрипсияи баръакс илова кунед, то ҳеҷ РНК гум нашавад ва дар ниҳоят cDNA-и ҳосилшударо мустақиман гузоред. ба реаксияи вақти воқеӣ.
Аммо чӣ мешавад, агар аз сабаби маҳдуд будани нуқтаи ибтидоӣ ё миқдори ками ифодаи генҳои мақсаднок, мо метавонем ҳама РНК-ро дубора коркард кунем ва то ҳол қолабҳои кофӣ барои гирифтани сигнали хуби вақти воқеӣ таъмин накунем?
Дар ин ҳолат, қадами пеш аз пурқувваткунӣ метавонад хеле муфид бошад.
Дар зер нақшаи баланд бардоштани ҳассосият пас аз транскрипсияи баръакс оварда шудааст.Пеш аз оғоз, мо бояд аз поёноб пурсем, ки ба кадом ҳадафҳо мо таваҷҷӯҳ дорем, то барои ин ҳадафҳо барои тақвияти пешакӣ тарҳрезӣ кунем.
Инро тавассути сохтани як праймери омехта бо то 100 ҷуфт праймерҳо ва як давраи реаксия аз 10 то 14 маротиба ба даст овардан мумкин аст.Аз ин рӯ, Мастер Микс, ки махсус барои ин талабот тарҳрезӣ шудааст, барои пеш аз тақвият додани cDNA-и гирифташуда лозим аст.
Сабаби муқаррар кардани шумораи давраҳо байни 10 ва 14 дар он аст, ки ин шумораи маҳдуди давраҳо тасодуфӣ байни ҳадафҳои гуногунро таъмин мекунад, ки барои тадқиқотчиёне, ки ба иттилооти миқдории молекулавӣ ниёз доранд, муҳим аст.
Пас аз тақвияти пешакӣ, мо метавонем миқдори зиёди cDNA-ро ба даст орем, то ҳассосияти муайянкунӣ дар қафо ба таври назаррас беҳтар шавад ва мо ҳатто метавонем намунаро ҳал кунем ва реаксияҳои зиёди PCR-ро дар вақти воқеӣ барои бартараф кардани хатогиҳои тасодуфии имконпазир иҷро кунем.
Вақти фиристодан: апрел-11-2023